Multiplex PCR nhằm phát hiện vi khuẩn đường ruột (Enterobacteriaceae) trong máu
Các phương pháp nhanh và nhạy là rất cần thiết để phát hiện số lượng nhỏ vi khuẩn đôi khi có thể làm nhiễm bẩn các đơn vị máu trong quá trình thu thập. Xét nghiệm PCR TaqMan multiplex 5'-nuclease (Hệ thống sinh học ứng dụng PE) đã được sử dụng để phát hiện một số loài vi khuẩn có thể gây ô nhiễm máu.
Các mồi Oligonucleotide được tạo ra cho các vùng gen 16S rRNA được bảo tồn ở bốn loài vi khuẩn khác nhau: Yersinia enteratioitica và Serratia, Klebsiella và Enterobacter. Hai đầu dò đã được thiết kế: SL-1 phát hiện các loài Serratia, Klebsiella và Enterobacter và YE-3 phát hiện Y. enteratioitica.
Khi TaqMan PCR được thực hiện với DNA nhiễm sắc thể được phân lập từ các mẫu nuôi cấy thuần chủng Serratia liquefaciens, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae và Enterobacter agglomerans, giới hạn phát hiện với đầu dò SL-1 là 1 đến 2 CFU. Đối với S. marcescens, độ nhạy là 8 CFU. Giới hạn phát hiện đối với Y. enteratioitica với mẫu dò YE-3 là 2 CFU. Khi tổng DNA nhiễm sắc thể được chiết xuất từ các mẫu máu toàn phần có thêm số lượng vi khuẩn Y. enteratioitica, S.liquefaciens, E. cloacae hoặc K. pneumoniae khác nhau, TaqMan PCR đã phát hiện 12 đến 16 sinh vật trong 1 mL máu.
Kết quả cho thấy xét nghiệm TaqMan PCR 5'-nuclease chỉ mất 3 giờ để thực hiện và có khả năng phát hiện số lượng vi khuẩn rất nhỏ trong mẫu.
